IgG是免疫球蛋白(Immunoglobulin,簡(jiǎn)稱IgG)的主要成分之一,分子量約為15萬~16萬,沉降生活費(fèi)數(shù)約為7s。IgG是動(dòng)物和人體血漿的重要成分之一。血漿蛋白質(zhì)的成分多達(dá)70余種,要從血漿中分離出IgG,首先要進(jìn)行盡可能除去其他蛋白質(zhì)成分的粗分離程序,使IgG在樣品中比例大為增高,然后再純化而獲得IgG。
對(duì)于研究細(xì)胞的科學(xué)人士來說,血清都不會(huì)陌生,其中胎牛血清是實(shí)驗(yàn)操作的???。一般而言,胎牛血清是指懷孕5-8個(gè)月的母牛被屠宰后,發(fā)育未完全的胎牛心臟穿刺采血后,通過一系列工藝處理最終獲得。此時(shí)胎牛血中含有特殊的生長(zhǎng)發(fā)育因子,一旦胚胎發(fā)育完全這些因子自動(dòng)消失。
通常細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí)需要加入血清,以維持細(xì)胞的生長(zhǎng)和存活。而除了血清之外,部分細(xì)胞在培養(yǎng)過程中需要添加胰島素和β-巰基乙醇(β-mercaptoethanol )等成分來維持細(xì)胞狀態(tài)。MCF-7和NIH:OVCAR-3等細(xì)胞需要額外添加胰島素,而Thp-1和MC3T3-E1 subclone 14等細(xì)胞則需要添加β-巰基乙醇,不同細(xì)胞加入量會(huì)有差異,需根據(jù)細(xì)胞類型判斷。
EMSA 主要基于蛋白-探針復(fù)合物在在凝膠電泳過程中遷移較慢的原理。根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)特異性和非特異性探針,當(dāng)核酸探針與樣本蛋白混合孵育時(shí),樣本中可以與核酸探針結(jié)合的蛋白質(zhì)與探針形成蛋白-探針復(fù)合物;這種復(fù)合物由于分子量大,在進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳時(shí)遷移較慢,而沒有結(jié)合蛋白的探針則較快;孵育的樣本在進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳并轉(zhuǎn)膜后,蛋白-探針復(fù)合物會(huì)在膜靠前的位置形成一條帶,說明有蛋白與目標(biāo)探針有互作。
抗體保存得當(dāng)與否,直接決定了抗體的活性和使用效果!如果抗體保存得當(dāng),大部分抗體活性都可以維持?jǐn)?shù)月甚至數(shù)年。以abcam 抗體保存方法為主,同樣也可以應(yīng)用到其他絕大部分的抗體產(chǎn)品!