無(wú)論是保存還是運(yùn)輸，請(qǐng)避免反復(fù)凍融。反復(fù)凍融，冰晶會(huì)破壞抗體和重組蛋白的空間結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致蛋白變性形成多聚體和重組蛋白構(gòu)象改變，從而降低抗體的結(jié)合能力，也加快了抗體球蛋白和重組蛋白的降解速度。抗體和重組蛋白保存得當(dāng)與否，直接決定了抗體和重組蛋白的活性使用效果，如果保存得當(dāng)，抗體和重組蛋白活性大部分都可以維持?jǐn)?shù)年。
我們進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室要穿好工作服，不要存僥幸心里，如果一不小心碰到酸，心愛(ài)的衣服燒個(gè)洞是小事，燒傷皮膚就麻煩了。不要嫌麻煩，一定要戴手套才做對(duì)身體有危害的實(shí)驗(yàn)，要對(duì)自己的身體負(fù)責(zé)。
紫外線消毒：在室溫20℃~25℃時(shí),220V 30W紫外燈下方垂直位置1.0m處的253.7mm紫外線輻射強(qiáng)度應(yīng)≥70uW/cm2,低于此值時(shí)應(yīng)更換。適當(dāng)數(shù)量的紫外燈,確保平均每立方米應(yīng)不少于1.5W。
質(zhì)粒具有穩(wěn)定可靠和操作簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)。如果要克隆較小的DNA 片段( ＜10kb) 且結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，質(zhì)粒要比其它任何載體都要好。在質(zhì)粒載體上進(jìn)行克隆，從原理上說(shuō)是很簡(jiǎn)單的，先用限制性內(nèi)切酶切割質(zhì)粒DNA 和目的DNA 片段，然后體外使兩者相連接，再用所得到重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化細(xì)菌，即可完成。但在實(shí)際工作中，如何區(qū)分插入有外源DNA 的重組質(zhì)粒和無(wú)插入而自身環(huán)化的載體分子是較為困難的。
輔酶盡管不同于酶的底物，但在作用方式上和底物類似，在酶反應(yīng)過(guò)程中與酶結(jié)合、分離及反復(fù)循環(huán)。輔酶用量的確定可將它們按底物處理。例如乳酸脫氫酶中輔酶按雙底物動(dòng)力學(xué)方程計(jì)算。
血清并不是生來(lái)就為養(yǎng)細(xì)胞而來(lái)的。血清是全血的一部分，組分很復(fù)雜，有 150 多種已知組分組分，多種未知組分。這些組分中，有些對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)是有利的，有些對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)是無(wú)作用的，有些對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)反而是有害的。
微生物的培養(yǎng)基通常指人工配制的適合微生物生長(zhǎng)繁殖,或積累代謝產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。廣義上說(shuō),凡是支持微生物生長(zhǎng)繁殖的介質(zhì)或材料,均可作為微生物的培養(yǎng)基。一個(gè)適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基配方,對(duì)發(fā)酵產(chǎn)品的產(chǎn)量和質(zhì)量有著極大的影響。
瞬時(shí)轉(zhuǎn)染：外源片段的表達(dá)時(shí)間短暫。這主要是因?yàn)橥庠磳?dǎo)入的裸露的載體整合入基因組的幾率非常低，所以以染色體外(episomal)形式存在，不能隨細(xì)胞分裂而一同復(fù)制導(dǎo)致最后拷貝數(shù)被稀釋導(dǎo)致的。而且考慮到細(xì)胞分裂會(huì)稀釋質(zhì)粒的量，所以起初轉(zhuǎn)染的質(zhì)?？截悢?shù)極高。這就導(dǎo)致瞬時(shí)轉(zhuǎn)染呈現(xiàn)一個(gè)高拷貝到低拷貝迅速降低的過(guò)程，且無(wú)法在這個(gè)系統(tǒng)上實(shí)現(xiàn)可誘導(dǎo)表達(dá)。
在western blot 過(guò)程中，分子量Marker就像個(gè)螺絲釘一樣沒(méi)雖然是個(gè)小細(xì)節(jié)，然而就是這樣一個(gè)小細(xì)節(jié)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有著不可忽視的作用。這個(gè) Western Blot參照家族的一員的作用主要是用來(lái)指示蛋白條帶所對(duì)應(yīng)的分子量大小，只有標(biāo)準(zhǔn)量精確無(wú)誤了，實(shí)驗(yàn)結(jié)果才有說(shuō)服力，除此之外，蛋白標(biāo)準(zhǔn)還有表示轉(zhuǎn)移成功或者蛋白在凝膠上的電泳程度等等的作用，所以選擇正確的蛋白Marker也是western blot實(shí)驗(yàn)成功的必要條件之一。
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