泛素化是指泛素分子在一系列酶的作用下共價(jià)結(jié)合到靶蛋白上的過程。這個(gè)過程涉及三種關(guān)鍵酶:E1泛素激活酶、E2泛素結(jié)合酶和E3泛素連接酶。首先,E1在ATP供能下激活泛素分子,然后將其轉(zhuǎn)移到E2上,最后E3識別并結(jié)合特定的底物蛋白,催化泛素從E2轉(zhuǎn)移到底物蛋白的賴氨酸殘基上,形成異肽鍵,完成泛素化修飾。
將血清脂蛋白用脂類染料(如蘇丹黑或油紅O等)進(jìn)行預(yù)染。再將預(yù)染過的血清置于瓊脂糖凝膠板上進(jìn)行電泳分離。通電后,脂蛋白向正極移動,并分離為幾個(gè)區(qū)帶。
瓊脂糖凝膠電泳是用瓊脂或瓊脂糖作支持介質(zhì)的一種電泳方法。對于分子量較大的樣品,如大分子核酸、病毒等,一般可采用孔徑較大的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳分離。
內(nèi)毒素可以與特定的檢測試劑發(fā)生反應(yīng),基于這一原理開發(fā)出內(nèi)毒素的檢測方法。常見的檢測方法包括凝膠法、重組C因子法、動態(tài)比濁法等。
紫外-可見吸收光譜法又稱紫外-可見分光光度法,它是研究分子吸收190nm~750nm波長范圍內(nèi)的吸收光譜,是以溶液中物質(zhì)分子對光的選擇性吸收為基礎(chǔ)而建立起來的一類分析方法。紫外-可見吸收光譜的產(chǎn)生是由于分子的外層價(jià)電子躍遷的結(jié)果,其吸收光譜為分子光譜,是帶光譜。
由單一B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體,稱為單克隆抗體。通常采用雜交瘤技術(shù)來制備,雜交瘤(hybridoma)抗體技術(shù)是在細(xì)胞融合技術(shù)的基礎(chǔ)上,將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細(xì)胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細(xì)胞融合為B細(xì)胞雜交瘤。用具備這種特性的單個(gè)雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)成細(xì)胞群,可制備針對一種抗原表位的特異性抗體即單克隆抗體。
凝膠色譜法又叫凝膠色譜技術(shù),是六十年代初發(fā)展起來的一種快速而又簡單的分離分析技術(shù),由于設(shè)備簡單、操作方便,不需要有機(jī)溶劑,對高分子物質(zhì)有很高的分離效果。凝膠色譜法又稱分子排阻色譜法。
BCA(Bicinchoninic Acid)法是一種常用的蛋白定量檢測方法,其原理是利用蛋白質(zhì)與銅離子在堿性溶液中發(fā)生絡(luò)合反應(yīng),生成穩(wěn)定的紫紅色復(fù)合物,再與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較,即可求出待測蛋白的濃度。該方法具有靈敏度高、準(zhǔn)確度高、操作簡便、抗干擾能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn),廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)等領(lǐng)域。